在抗体开发领域，选择合适的宿主动物是成功的第一步。小鼠因其成熟的杂交瘤技术一直长期占据主导地位。然而，随着在科研和诊断中对抗体质量要求的不断提高，研究者们开始考虑选择除小鼠外的其他物种。在这一过程中，兔源性抗体（兔单抗）因其独特的免疫机制和卓越性能，正成为高难度抗体开发的优选方案。
兔抗的天然优势：为何更胜一筹？
（1）高亲和力
兔抗的解离常数（KD值）可达10⁻¹²M（皮摩尔级别），显著高于鼠抗的10⁻⁹M（纳摩尔级别），表明兔抗与抗原结合更紧密。兔抗对微小差异的抗原（如蛋白翻译后修饰）和小分子（如类固醇激素）具有更强特异性，而鼠抗易产生交叉反应。
（2）高多样性
兔的B细胞免疫组库发育经历三个阶段，比小鼠多一个在肠相关淋巴组织中进行体细胞高频突变（SHM）的阶段，这使兔抗能产生更丰富的抗体多样性，识别更多抗原表位。此外，兔抗体的CDR3区域比小鼠长，增加一个氨基酸的长度将导致其抗体多样性提高20倍。相比之下，小鼠的免疫系统相对简单，抗体库多样性较低。
（3）高表位识别能力
兔抗能识别小鼠无法免疫的抗原表位，尤其适用于人鼠同源蛋白的研究，可直接用于小鼠疾病模型，避免替代抗体的干扰。另外，针对小分子等高难度表达的识别，兔抗也有明显的优势。
尽管兔抗优势明显，但其单克隆抗体的开发却长期受限于技术瓶颈。传统的兔杂交瘤技术存在专利壁垒且稳定性不佳。近年来，单B细胞抗体筛选技术的兴起，为高效获取兔单抗打开了新局面。
Cytostar®直击更高亲和力的源泉——浆细胞
当前主流的兔单B细胞技术平台，大多以记忆B细胞作为筛选的起点。记忆B细胞需要通过体外激活才能分化成分泌抗体的浆细胞，此过程无法完全复现体内抗体天然的成熟过程。况且，如果我们的目标只是记忆B细胞，流式分选技术其实已经能够高效、精准地完成筛选——无需经历繁琐耗时的体外激活与培养流程，即可直接获取目标细胞，大大提升了实验效率。
凌芯生物Cytostar®平台
凌芯生物自主研发的Cytostar®高通量单细胞筛选平台，直接将目标锁定在原代浆细胞。与由记忆B细胞体外分化而来的浆细胞不同，原代浆细胞是经过体内天然免疫选择、亲和力成熟度更优的终极效应细胞群体。从源头上筛选这类细胞，意味着我们能直接捕获那些已经过体内“优化”、具备更高亲和力与特异性的先导抗体分子。
凌芯生物Cytostar®平台兔单抗筛选流程
案例分享-小分子（SM）化合物抗体筛选
（1） 免疫及效价检测
通过对兔子进行常规的免疫及效价鉴定，确定免疫符合要求。
图1 兔子免疫效价检测结果
（2） 细胞准备及On-chip assay
收集兔PBMC或脾细胞，裂红，计算活率并计数。本案例中选取1E6的脾细胞，用一块芯片进行筛选。
利用荧光标记的抗原，对于细胞分泌的抗体进行评价。在2个小时内，细胞分泌的阳性抗体将会募集足够量的荧光标记的抗原，从而显示出“光圈”信号。之后被设备识别并将阳性细胞分离出来，进行后续工作。本项目中，共识别到510个阳性信号，完成192个细胞的挑取。
图2 On-chip assay
（3）PCR、表达及功能验证
对挑选的细胞进行后续的PCR，调取抗体V区（VH+VL，84%）。选取部分样本进行后续表达验证并进行了序列多样性分析。通过表达验证，最终获得26个阳性序列，且CDR多样性符合预期。其中，有13个抗体对于1ng/mL标准品的抑制率＞50%，优于兔多抗（IC50=1ng/mL）。从结果中，选取2株抗体进行胶体金层析试纸条的制备和评价，最终显示效果(0.5ng/mL)明显优于市场上已有的鼠抗胶体金试纸条（检测限10-20 ng/mL）。
图3 PCR结果
图4CDR区域多样性比较
图5 兔单抗胶体金评价结果
为何选择凌芯生物Cytostar®平台？
凌芯生物的兔单抗解决方案，以其独特的筛选源头和平台技术，为您带来三大核心优势：
1、源头优势：
独家聚焦原代浆细胞，直接筛选体内天然成熟的优质抗体，跳过了体外激活的不确定性，更容易获得高亲和力候选分子。
2、多样性保障
几十万的筛选通量和筛选方案的灵活性优势，最大限度的保留了抗体的天然多样性，可以有效保证筛选的有效性和可靠性。
3、一站式高效交付
整合从细胞到序列的全流程，大大缩短了抗体开发周期，助力您快速获得可用于科研、诊断乃至治疗开发的优质兔单克隆抗体。
选择凌芯Cytostar®，就是选择从更高起点，开启您的高亲和力兔单抗发现之旅。